体外分化
胚胎干细胞在体内外可以分化为各种类型的细胞。我们的体外分化方法有利于神经前体细胞通过在最少量的培养基内选择（第3步），在有bFGF存在的情况下扩增（第4步）并最终分化在第5步。细胞全程培养在37℃，5％CO2，100％湿度条件下。一般体外诱导向神经细胞方向分化，也可以采用低浓度的RA进行诱导。
时间线（总时间为27～34天）
第2步；4＋1天 第3步；4－10天 第4步；4天 第5步；10－15天
体外向心肌细胞方向分化
胚胎干细胞在体外去除LIF情况下会自然向心肌细胞方向分化，小鼠的R1系一般在第7-8天自然出现搏动的心肌细胞，与胚胎发育时间线是完全一致的。
培养基
EB
配制一20×不含DMEM，FBS，LIF的溶液（该溶液也能用于ES培养基——见前述）。分装在50ml 离心管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。将21ml该溶液和50ml FBS加入450mlDMEM中制备培养基，0.2μm滤膜过滤。贮存于4℃。
贮存液
DMEM（高糖）
胎牛血清
L-谷氨酰胺（200mM）
MEM NEAA（10mM）
HEPES（1M）
β-巯基乙醇（55Mm）
PEST（P104U/mlS104μg/ml
ITSFn and N3（分化培养基）：
配制一20×不含DMEM/F12的溶液。分装在15ml 离心管中，（稀释为1×，ITSFn 7.05ml，N3 12.55ml），0.2μm滤膜过滤，贮存在-20℃。将该溶液加入DMEM/F12中制备培养基，贮存于4℃。
贮存液
DMEM（高糖）
转铁蛋白50mg/ml
胰岛素5mg/ml
亚硒酸钠300μM
黄体酮（20μM）
腐胺（100μM）
PEST（P104U/ml S104μg/ml）
层粘连蛋白100μg/ml
纤维连接蛋白250μg/ml
碱性rhFGF， 10μg/ml
*在第4步将bFGF加入N3培养基使终浓度为10ng/ml.
责任编辑：刀刀
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